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Na,K-ATPase（NKA）與推定的taurinetransporter（TAUT）對廣鹽性二枚貝類-文蛤滲透壓調控之影響

為了解決caco外套的問題，作者葉柏伶 這樣論述：

文蛤（Meretrix lusoria）為廣鹽性的二枚貝類，可生長在10‰- 45‰的鹽度下，外界環境鹽度改變時，血淋巴液中的滲透壓會隨之改變，故在滲透壓調控機制上屬於滲透順應者（osmoconformer）。面對外界鹽度改變時，會利用堆積或釋放無機離子，如：Na+和Cl-，與有機滲透物質，如：胺基酸，來維持滲透壓的平衡。本實驗以文蛤為材料，先觀察其滲透壓調節器官鰓和外套膜的型態，並探討鹽度改變時，血淋巴液中滲透壓、離子與鰓和外套膜中Na+, K+-ATPase（NKA）活性、游離胺基酸的變化情形，最後進行胺基酸運送蛋白的分子選殖，分析此基因mRNA和蛋白質的變化。實驗結果指出：文蛤的鰓由上

下兩片鰓薄板所組成，其間相連的間隔形成水通道，鰓絲平行規則的排列在鰓薄板上，鰓絲外緣佈滿纖毛；外套膜則由纖毛、表皮細胞、結締組織和許多縱橫交錯的肌肉纖維所構成，可依靠肌肉的伸展和收縮控制水流的進出。文蛤長期馴養在10、20、35‰ 鹽度下，血淋巴液中滲透壓、鈉離子、氯離子濃度在鹽度10‰ 時最低，35‰ 時最高；NKA活性在鰓上並無顯著變化，在外套膜上則在鹽度35‰時有顯著增加；鰓和外套膜中總游離胺基酸含量，皆在鹽度10‰ 時最低，35‰ 最高，其中又以taurine含量最多。在面對高鹽度的環境時，血淋巴液中滲透壓、[Na+]、[Cl-]在3小時之內急遽增高，而後即維持平衡；鰓和外套膜上NKA

活性分別在72、120小時和24、72、120小時有顯著升高；鰓和外套膜中taurine的含量，皆在240小時才有顯著增高。在面對低鹽度的環境時，血淋巴液中滲透壓、[Na+]、[Cl-]在24小時有顯著下降，而後維持平衡; 鰓上NKA活性無顯著變化，外套膜上NKA活性在3小時顯著上升；鰓中taurine的含量，在24小時後則持續顯著下降，而外套膜中taurine含量，在240、360小時有顯著下降。綜合上述實驗，文蛤在高鹽度環境下，會先活化NKA活性以調控離子，而後則利用體內生合成游離胺基酸，如: taurine的堆積來取代；在低鹽度環境下，短時間內NKA活性增高以調控離子，並將游離胺基酸，如

: taurine排出，以維持滲透壓的平衡。Taurine在文蛤總游離胺基酸中含量最高，故欲進行taurine transporter（TAUT）分子選殖。所選殖到的蛋白質全長為657個氨基酸序列，有12個穿膜區域，當文蛤處於含有500M的外生性taurine中，分析此蛋白質的mRNA有顯著降低出現，故推測應是taurine transporter （TAUT）。與其他物種taurine transporter約有50% 的相似度，此基因的分佈，在鰓、外套膜、心臟、腸、胃和閉殼肌中皆可偵測到。長期馴養一個月後。鰓上TAUT mRNA和蛋白質含量在鹽度10‰ 時最高。35‰ 時最低；外套膜上T

AUT mRNA在鹽度35‰時最高。10‰ 時最低，而蛋白質則無顯著變化，在高鹽環境下，鰓上TAUT mRNA在第6小時大量表現，而蛋白質並無顯著變化，到240、360小時才顯著降低；外套膜上TAUT mRNA在轉移後6小時大量表現，蛋白質在第24、72小時也會大量表現。在低鹽環境下，鰓上TAUT mRNA並無顯著變化，直到第240、360小時才顯著上升，而蛋白質在3小時後即顯著增加；外套膜上TAUT mRNA在3小時後顯著降低，而蛋白質在第24、72小時有顯著增高。由以上實驗發現，TAUT mRNA會受到高鹽度刺激而增高表現，促使TAUT蛋白質表現增加；在低鹽度下TAUT mRNA抑制或不表

現，而蛋白質量則出現增高的情形，可能是利用已經存在的TAUT mRNA轉譯成蛋白質。由前述實驗顯示出廣鹽性二枚貝類之滲透壓調控，短期主要利用離子，而長期則利用胺基酸的堆積，其中NKA和TAUT在維持鰓和外套膜滲透壓之平衡上更扮演重要的角色。