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Na,K-ATPaseα次單元在吳郭魚滲透壓調節中的角色：mRNA和蛋白質的表現

為了解決nici兔子的問題，作者馮馨慧 這樣論述：

利用快速放大cDNA基因 (rapid amplification of cDNA ends，RACE) 的方式，選殖到吳郭魚Na,K-ATPase α1和α3兩種次單元殖株TG33和TH3。其中TG33之全長cDNA共3390bp，可轉譯出1023個胺基酸；TH3之全長cDNA共3581bp，可轉譯出1010個胺基酸。與其他動物的同型次單元相比較，分別有高達91 ﹪和88 ﹪的相同度，而α1與α3間則只有80 ﹪的相同度，隨後經由離體轉錄及轉譯的方式證實α1和α3為100 kDa的蛋白質。 比較TG33和TH3之cDNA序列，選擇具明顯差異的3''-untranslat

ed region設計探針P1和P3。利用北方和南方雜合試驗證實，P1和P3兩種探針彼此沒有交互作用 (cross reaction) 產生。由北方墨點法的結果顯示，吳郭魚的TG33主要以腎臟和腸組織表現量較高；TH3則是在腦部和心臟的含量較豐富。另外，TG33在吳郭魚鰓部的表現有隨著鹽度提高而增加的趨勢，海水魚鰓部的表現約是淡水魚的10倍，表示Na,K-ATPase α1次單元與吳郭魚滲透壓調節有關。 進一步參考α1和α3之胺基酸序列，選擇可供區分兩者之序列合成oligopeptides，並以之為抗原注射兔子以產生抗體Ta1-2。而經由西方墨點法確認，Ta1-2對於Na,

K-ATPase α1次單元具有專一性，隨後便利用此抗體調查α1在吳郭魚各組織的表現量，發現腎臟和腸組織的含量較高。這樣的結果與北方墨點法的資料相吻合，不過，其他組織也有相當量的表現。此外，鹽度的變化會影響α1蛋白的表現，如海水馴化之吳郭魚鰓部α1的蛋白質表現量約是淡水馴化吳郭魚的15倍。總之，吳郭魚在面對不同鹽度環境時，可經由調節鰓部Na,K-ATPase α1次單元的mRNA和蛋白質的表現而維持體內滲透壓的平衡。